<thead id="gxlh8"><tt id="gxlh8"><pre id="gxlh8"></pre></tt></thead>
  • <p id="gxlh8"><strong id="gxlh8"><small id="gxlh8"></small></strong></p>

      <pre id="gxlh8"><strong id="gxlh8"><xmp id="gxlh8"></xmp></strong></pre>
    1. <p id="gxlh8"></p>
    2. 銷售熱線

      19126518388
      • 技術文章ARTICLE

        您當前的位置:首頁 > 技術文章 > 如何提高細胞的轉染效率?

        如何提高細胞的轉染效率?

        發布時間: 2022-10-20  點擊次數: 664次
        • 總有一種轉染方法適合你



        一、

        怎樣提高細胞的轉染效率?有的同學做了轉染,連接目的基因的載體帶熒光,轉染后48小時在熒光顯微鏡下觀察,卻發現只有約百分之15左右的熒光,問該怎么提高轉染效率?有沒有必要接著往下做篩選?還是重新轉染一次?


        1、

        如果要是做穩定篩選的話,15%的轉染率應該夠了。

        提高轉染效率的話,可以適當降低轉染時細胞的密度(我試過60~70%的密度比90%更好一些),另外還有可能就是細胞的生長狀態,還有在接種后24h內進行轉染。


        2、

        轉染應該在對數生長期內進行才能保證轉染效率,因為該時期細胞生長狀態良好,容易吸收外源質粒,而不同細胞株的對數生長期是有差異的,因此建議先繪制培養細胞的生長曲線、確定其對數生長期,然后再著手做轉染。


        二、

        有同學用293細胞包裝病毒,轉染有熒光(約百分之二十),但是感染總是沒有熒光,感染細胞狀態很好,第四天后開始變圓脫落。轉染后的細胞沒有抗性,不能篩。


        1、

        20%的轉染率太低了,一般用293T包裝慢病毒轉染率達到80%以上.轉染率太低和293T的代數有關系,還和質粒的濃度和純度有關系。


        2、

        轉染的前一天將細胞傳代,根據你的細胞生長速度,傳成適當的密度,保證第二天細胞達到70%左右,做轉染。有的人用脂質體轉染,由于脂質體對細胞有毒性作用,細胞特別容易脫落,所以防止細胞脫落,是提高轉染效率的關鍵。


        3、

        轉染的效率根本上還是由細胞種類決定的,有些細胞系好轉,效率高,有些就不怎么好了。但是我們還是可以盡可能的提高轉染效率,之前提過,細胞生長狀態要好,這個很重要。另外,每種細胞系都有自己的最好用的轉染試劑,要多看文獻知道這種細胞系用哪種轉染試劑最多。然后自己可以按照DNA和轉染試劑的比例做個曲線,看看reporter的表達效率,做到好的轉染效率。其實DNA的質量也很重要,不僅僅是內毒素影響細胞的生存,一般情況下DNA超螺旋最好比列越高越好。為了促進表達,轉染前線性化也可以。

        如果有些細胞系確實難轉,就應該考慮其他方法了,電穿,病毒之類的。amaxa的nucleofector可以直接把質粒打到核里,很好用。


        以上就是本期的內容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

         

        安培生物科技有限公司介紹:

        安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產,包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務,努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業


      色噜噜久久综合伊人超_色欲久久久天天天综合网精品_少数民族美乳国产在线_樱花草在线社区WWW日本影院
      <thead id="gxlh8"><tt id="gxlh8"><pre id="gxlh8"></pre></tt></thead>
    3. <p id="gxlh8"><strong id="gxlh8"><small id="gxlh8"></small></strong></p>

        <pre id="gxlh8"><strong id="gxlh8"><xmp id="gxlh8"></xmp></strong></pre>
      1. <p id="gxlh8"></p>