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        免疫細胞轉染實驗失敗了千萬不要慌!

        發布時間: 2022-11-03  點擊次數: 401次
           免疫細胞轉染在細胞生物學和分子生物學中占據重要地位,廣泛用于基因與蛋白功能研究,成為實驗室工作中的常規技術手段之一。沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗,需要根據細胞類型和實驗進行選擇。理想的方法應具有高轉染效率,低細胞毒性和對正常生理學的影響最小,并且易于使用和具有可重復性等特點。常用于哺乳動物細胞轉染的方法有磷酸鈣法、陽離子脂質體法、病毒轉染法和電穿孔法。
          然而,免疫細胞轉染實驗出現失敗也不要驚訝,常見的異常結果是細胞大量死亡、轉染效率不高、重復實驗不穩定。如何找到問題所在,讓實驗順利進行,就顯得比較重要。例如細胞轉染實驗失敗導致細胞大量死亡如何處理我們根據以下的分析來針對性解決:
          1.細胞狀態不佳:選擇生長旺盛的細胞進行轉染實驗。
          2.核酸純度不夠或內毒素過高:采用高質量核酸與去內毒素的核酸。
          3.目的蛋白對細胞的毒性:嘗試進行再設計。
          4.轉染試劑過多:降低轉染試劑的量;轉染后4-6h換液。
          5.污染:排查污染源或重新復蘇細胞。
          6.抗生素存在:特別是陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,使抗生素可以進入細胞,降低細胞的活性,導致轉染效率降低,可降低抗生素濃度或不使用抗生素。
          7.營養不足:如果無血清條件下轉染的,要根據狀態及時補充營養。
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